FITC標(biāo)記細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Annexin V-FITC
FITC標(biāo)記細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Annexin V-FITC(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒??梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白,參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性。
FITC標(biāo)記細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Annexin V-FITC
Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡(jiǎn)稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期,不同類型的細(xì)胞都會(huì)把磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面,即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。
用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin V,即Annexin V-FITC,就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡(jiǎn)單而直接地檢測(cè)到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。
本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液,碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,呈現(xiàn)紅色熒光。對(duì)于壞死細(xì)胞,由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失,Annexin V-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi),與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結(jié)合,從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。
綜上所述,參考下圖,用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色后,正常的活細(xì)胞不被Annexin V-FITC和碘化丙啶染色(下圖左下角);凋亡早期的細(xì)胞僅被Annexin V-FITC染色,碘化丙啶染色呈陰性(下圖右下角);壞死細(xì)胞和凋亡晚期的細(xì)胞可以同時(shí)被Annexin V-FITC和碘化丙啶染色(下圖右上角)。下圖左上角出現(xiàn)的是許可范圍內(nèi)的檢測(cè)誤差。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
C1063-1 | Annexin V-FITC | 250μl |
C1063-2 | Annexin V-FITC結(jié)合液 | 26ml |
C1063-3 | 碘化丙啶染色液 | 550μl |
— | 說(shuō)明書 | 1份 |
保存條件:
4℃保存,Annexin V-FITC和碘化丙啶染色液需避光保存,半年有效。為長(zhǎng)期保存,可以把碘化丙啶染色液適當(dāng)分裝后-20℃保存,Annexin V-FITC結(jié)合液可以直接-20℃保存。
注意事項(xiàng):
如果有細(xì)菌或真菌污染,會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,zui終導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
需自備PBS。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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